1．6 统计学处理
采用SPSS10.0统计分析软件进行统计学处理，均数比较采用Student’s t检验。
２ 结果
2．1 HA6722及其对照Scramble6722对MDAMB453及MDAMB231细胞系的IC50比较,见表1。
2．2 HA6722及其对照对两种细胞增殖活性的影响表1 HA6722对两种乳腺癌细胞系的IC50比较与HA6722 MDAMB453相比，t=74.3, P＜0.05; △与Scrambl6722相比，t=1.33, P＞0.05 不同浓度HA6722、Scramble6722作用于对数生长期的细胞72h之后，前者可以显著抑制HER2过表达细胞MDAMB453细胞的增殖，而且此种作用随着浓度的增加而增强；同样浓度的HA6722对HER2低表达的MDAMB231细胞却没有相应的抑制作用, 见图1。2．3 HA6722对MDAMB453细胞HER2受体表达影响
免疫细胞化学方法显示，经80～200nmol·L－1浓度HA6722处理24～48h后，MDAMB453细胞HER2蛋白水平呈现明显的下调，从基础水平的3+染色减低到200nmol·L－1浓度处理后几乎阴性的状态,见图2。
2．4 HA6722对MDAMB453细胞HER2 mRNA表达影响
RTPCR方法显示，经HA6722处理后，MDAMB453细胞HER2 mRNA呈现下调趋势，而且随着HA6722浓度增加，这种下调越趋明显，当HA6722浓度达到200nmol·L－1时，HER2 mRNA几乎受到了完全的抑制，而对照寡核苷酸Scramble及Random对HER2 mRNA的表达几乎没有影响, 见图3、4。
3 讨论
HER2/neu的过表达与乳腺癌的生物学行为关系十分密切。有研究表明，以HER2 mRNA为靶点的反义寡核苷酸可以特异性抑制HER2/neu过表达乳腺癌细胞的生长，甚至比HER2受体的单抗更为强大[4]。针对不同基因的反义药物研究，近年来呈现快速发展的趋势，并显示出诱人的发展前景[5]。以bcl2等基因为靶点的反义药物已有大量的研究，如G3139已在体外及体内研究中均显示出明确的抗肿瘤作用[6，7]，并可增强细胞毒药物的抗肿瘤效果[8]
有作者发现，以HER2为靶点的反义寡核苷酸HA824对HER2过表达乳腺癌细胞SKBR3体外增殖具有抑制作用[9]。是否具有序列特异性抑制肿瘤细胞生长的作用，是衡量反义药物优劣的重要指标。本研究中，我们以另一种HER2过表达乳腺癌细胞株MDAMB453细胞为对象，对本研究室设计合成的反义寡核苷酸HA6722进行体外抗乳腺
癌增殖作用及其机理的研究。结果表明，HA6722对HER2/neu过表达乳腺癌细胞MDAMB453细胞的抑制呈现良好的剂量依赖性，而对HER2/neu低表达的MDAMB231细胞却没有相同的作用。
HER2/neu过表达乳腺癌细胞的生长有赖于持续高水平的HER2受体激活，而HER2受体的下调将阻断细胞生长的信号传导通路。本研究表明HA6722对MDAMB453细胞HER2受体及mRNA表达呈现剂量依赖性下调，而具有相同碱基组成的Scramble及随机序列对HER2 mRNA几乎没有影响。
【参考文献】
［1］ Pegram MD, Finn RS, Arzoo K, et al. The effect of HER2/neu overexpression on chemotherapeutic drug sensitivity in human breast and ovarian cancer cells［J］. Oncogene，1997， 15(5):537547.
［２］ Yang SP, Song ST, Song HF.Advancements of antisense oligonucleotides in treatment of breast cancer［J］. Acta Pharmacol Sin， 2003，24(4):289295.［３］ Weiss RH, Marshall D, Howard L, et al. Suppression of breast cancer growth and angiogenesis by an antisense oligodeoxynucleotide to p21(Waf1/Cip1)［J］. Cancer Lett， 2003，189(1):3948.
［４］ Roh H, Pippin JA, Green DW, et al.Oncolgene［J］． 2000， 19(53):61386143.
［５］ Pirollo KF, Rait A, Sleer LS, et al. Antisense therapeutics: from theory to clinical practice［J］. Pharmacology ＆ Therapeutics， 2003, 99(1):5577.
［６］ Nahta R, Esteva FJ. bcl2 antisense oligonucleotides: a potential novel strategy for the treatment of breast cancer\[J\]. Semin Oncol,2003,30(5 Suppl 16):143149.
\[7\] Morris MJ, Tong WP, CordonCardo C, et al. Phase Ⅰtrial of bcl2 antisense oligonucleotide(G3139) administered by continuous intravenous infusion in patients with advanced cancer［J］.Clin Cancer Res，2002，8(3):679683.
［8］ Tanabe K, Kim R, Inoue H, et al.Antisense bcl2 and HER2 oligonucleotide treatment of breast cancer cells enhances their sensitivity to anticancer drugs［J］. Int J Oncol， 2003，22(4):875881.
［9］ 杨栓平，宋海峰，宋三泰，等．靶向HER2 mRNA反义寡核苷酸对SKBR3乳腺癌细胞Caspase3蛋白表达的影响［J］．中国药理学通报，2003，19（5）：505507．
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