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口腔鳞状细胞癌基质金属蛋白酶9表达及其与血管生成的关系
载入中...【摘要】 ［目的］探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）发生、发展过程中基质金属蛋白酶9（MMP9）对微血管生成的意义。［方法］采用免疫组化SP法对65例OSCC、40例非典型增生、22例正常口腔黏膜进行MMP9、CD34免疫组化染色。检测OSCC、非典型增生、正常口腔黏膜中MMP9的表达和微血管密度（MVD），并分析MMP9的表达与MVD之间，以及它们与OSCC临床病理特征之间的关系。［结果］OSCC组中MMP9的表达与MVD值均高于非典型增生组，在非典型增生组中均高于正常口腔黏膜组；OSCC组、非典型增生组和正常口腔黏膜组中MMP9表达与MVD有正相关趋势；MMP9的表达与肿瘤大小、淋巴结转移密切相关，MVD与淋巴结转移密切相关。［结论］MMP9可能是OSCC的重要促血管生成因子之一。
【关键词】 口腔鳞状细胞癌 免疫组织化学 基质金属蛋白酶9 CD34
Correlation between Expression of Matrix Metalloproteinase9 and Angiogenesis in Oral Squamous Cell Carcinoma
Abstract: ［Purpose］ To study the significance of matrix metalloproteinases9 (MMP9) on micro angiogenesisin carcinogenesis and progression of oral squamous cell carcinoma (OSCC). ［Methods］MMP9 and CD34 were detected by immunohistochemistry SP method in 22 cases of normal oral mucosa, 40 cases of atypical hyperlasia and 65 cases with OSCC. The expression of MMP9 and microvessel density (MVD) were detected in the three groups and the relationship between expression of MMP9 and MVD and its relationship with OSCC clinicpathological characteristics were reviewed.［Results］ The expression of MMP9 and the level of MVD in OSCC were significantly higher than that in atypical hyperlasia. The expression of MMP9 and the level of MVD in the group of atypical hyperlasia were significantly higher than that in normal oral mucosa. The expression of MMP9 were closely related with MVD in the tumor group, atypical hyperlasia group and normal oral mucosa group. MMP9 expression in OSCC was significantly associated with lymph node metastasis and tumor size. MVD in OSCC was significantly associated with lymph node metastasis. ［Conclusion］ MMP9 may be one of important factors in angiogenesis ofOSCC.
Key words: oral squamous cell carcinoma; immunohistochemistry; matrix metalloproteinases9; CD34
肿瘤内新生血管的生成是影响肿瘤增殖和转移的重要因素，近年来的研究表明[1]基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases， MMPs）在肿瘤血管生成中有重要作用，明胶酶是MMPs的一个亚类，包括基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9），其中MMP9与肿瘤血管生成的关系研究较少，研究结果也不一致，有关口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）组织中MMP9与肿瘤血管生成的关系，更少见报道。本研究通过免疫组织化学技术检测口腔鳞状细胞癌组织中MMP9和CD34的表达，并对MMP9的表达与微血管密度（MVD）做定量分析，探讨口腔鳞状细胞癌组织中MMP9对血管生成的作用及其临床意义。
1 材料与方法
1.1 资料来源
本研究所用石蜡包埋组织标本选自安徽医科大学第一附属医院1998年1月至2001年12月的手术患者。口腔鳞状细胞癌患者65例，均为作口腔鳞状细胞癌根治性手术的患者，术前未作放疗或化疗，术后经病理诊断确诊为口腔鳞状细胞癌，男性35例，女性30例，中位年龄45.5岁；肿瘤最大直径≤3cm者35例，>3cm者30例；有淋巴结转移者31例，无淋巴结转移者34例；临床分期为Ⅰ期15例，Ⅱ期28例，Ⅲ期15例，Ⅳ期7例；其中高分化鳞癌18例，中分化鳞癌24例，低分化鳞癌23例。口腔非典型增生病例40例，来自其他口腔疾患手术标本，正常口腔黏膜22例，取自活检标本，均未做过任何治疗。
1.2 方 法
鼠抗人MMP9多克隆抗体和CD34单克隆抗体，免疫组化SP试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。 所有组织均经10%甲醛液固定，常规石蜡包埋， 包埋组织标本作4μm连续切片，免疫组化SP法染色参照试剂说明书进行， MMP9、CD34均采用高温直接煮沸法修复抗原。用已知的阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
⑴MMP9以实质细胞胞膜或胞质出现明显的黄色或棕黄色颗粒判断为阳性着色。定量及图像分析采用同济医大千屏影像公司HPLAS1000病理图像分析系统,将切片上的阳性染色信号转为灰度进行分析。
⑵MVD计数，参照Weinder[2]报道的方法进行微血管计数，先在低倍镜（×100）下观察确定血管密度最高处，在（×200）视野下选择3个高血管密度区，计算单位视野（×200）平均血管数。单个内皮细胞或内皮细胞簇，均作为一个血管计数，而直径大于约8个红细胞的血管，有厚肌壁的血管以及硬化区的血管不在计数范围内。
1.4 统计学处理
运用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析，采用t检验和F检验。
2 结 果
2.1 MMP9在正常口腔黏膜组织、非典型增生、OSCC中的表达和分布
MMP9阳性细胞胞浆或胞膜呈棕黄色，偶尔可见细胞核着色，阳性颗粒多呈团块状。MMP9在癌组织中于肿瘤细胞(见图1)、增生上皮细胞和间质细胞均有阳性表达，在血管平滑肌细胞，血管内皮细胞上也有明显阳性表达(见图2)，MMP9阳性分布呈异质性，阳性细胞多位于癌巢边缘和管腔周围，其中基底膜附近的肿瘤细胞染色尤为明显。MMP9在非典型增生的表达主要位于增生上皮细胞的胞质中，在间质细胞中偶见染色。MMP9在正常口腔黏膜组织表达微弱，仅见于少数上皮细胞的胞质中。对切片的MMP9染色进行灰度分析，结果显示从正常口腔黏膜，非典型增生到OSCC， MMP9的表达逐渐增高，OSCC组中MMP9表达显著高于非典型增生组织（P<0.05），非典型增生组中MMP9表达显著高于正常口腔黏膜（P<0.05），见表1。 MMP9在瘤径>3cm组中的表达显著高于瘤径≤3cm组（P<0.05），在淋巴结转移组中的表达显著高于无淋巴结转移组（P<0.05），而与肿瘤的分化程度、临床分期无关（见表2）。
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