报告基因对研究肿瘤的发生、发展、浸润、转移的分子机制提供了简便的观察方法，并在肿瘤的基因治疗中作为活细胞的筛选标志，方便、省时、无毒副作用。GFP是一种被广泛应用的报告基因。GFP基因能在异源细胞中表达并且无细胞毒性，在活体内通过荧光显微镜就能清晰地观察到。但是目前作为标记基因应用较多的是GFP的增强型突变体EGFP，它的荧光波长发生偏移，发射出的荧光强度要比野生型大6倍以上，所以EGFP比野生型GFP更适合作为一种报告基因来研究基因表达、调控、细胞分化及蛋白质在生物体内的转运和定位等[9]。
本文根据基因工程原理将目的基因bax和报告基因EGFP通过IRES序列连接起来，两个基因在同一个启动子下转录成单链mRNA，但翻译时又是相互独立的，不会形成嵌合蛋白[10]，保证了Bax蛋白的生物活性，并且理论上只要有EGFP的表达，bax基因也肯定会表达，比同时共转染两个载体要方便，最重要的是能准确分析目的基因的表达情况，所以，只要通过荧光显微镜观测其EGFP有无表达，即可判断bax基因是否表达，简单易行。一般商品化的逆转录病毒表达载体只有一个多克隆位点，只能插入一个外源基因，本实验在现有基础上，通过IRES序列构建双基因表达的逆转录病毒表达载体，实验已证实此方法是可行的，并通过此方法成功建立了带有报告基因EGFP高表达Bax的Hela细胞株。
【参考文献】
[1] Oltvai ZN, Mlilliman CL, Korsmeyer SJ, et al. Bcl2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog Bax, that accelerates programmed cell death [J]. Cell, 1993,74(4):609-619.
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