【摘要】 ［目的］ 应用免疫组化法，观察茶多酚口服、静脉与局部注射三种给药途径对移植性小鼠血管内皮生长因子（VEGF）、金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ（TIMP-2）表达影响，进行茶多酚抗肿瘤新生血管生成研究。［方法］ 建立移植性S180小鼠肿瘤动物模型，随机分茶多酚口服灌胃、局部注射、腹腔注射、人参皂苷Rg3口服灌胃、CTX腹腔注射对照、生理盐水肿瘤模型对照、正常空白对照7组，5d后取肿瘤组织，石蜡包埋、切片，免疫组化染色观察 VEGF、TIMP-2表达。［结果］ 茶多酚口服及局部注射组可明显降低S180荷瘤VEGF表达水平、增加TIMP-2表达水平。［结论］ 茶多酚口服、局部注射具有抗肿瘤新生血管生成作用。
【关键词】 茶多酚 血管内皮生长因子 金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ
The Effect of Tea Polyphenol on Expression of Tumor Blood Vessels Related Factors in Transplantation S180 Mice
Abstract:［Purpose］To investigate the effect of tea polyphenol on vascular endogenous growth factor (VEGF) and the expression of tissue inhibitor of metalloproteinase Ⅱ(TIMP-2) in transplantation S180 mice by 3 ways of administration: oral, intravenous and local injection. ［Methods］ Transplantation S180 mice tumor models were randomly divided into 7 groups based on different tea polyphenol administration: oral administration, local injection, intraperitoneal injection, Panaxsaponin Rg3 oral, CTX intraperitoneal injection, normal saline and blank control group. Five days later, the tumor tissue was sliced for examination with immunohistochemical method for VEGF and TIMP-2 expression. ［Results］ Oral administration and local injection of tea polyphenol could markedly reduce expression of VEGF and increase expression of TIMP-2 in S180 bearing tumor. ［Conclusion］ Tea polyphenol by oral administration and local injection reveals inhibiting effect of vascular growth.
Key words: tea polyphenol; vascular endogenous growth factor; tissue inhibitor of metalloproteinase Ⅱ
实验研究已经证实，茶多酚不同剂量、不同给药途径对移植性S180小鼠肿瘤具有明显抑制作用，为探讨其作用机制，我们应用免疫组化法，选用血管内皮生长因子（vascular endogenous growth factor，VEGF），金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ（tissue inhibitor of metalloproteinas Ⅱ，TIMP?鄄2）作为检测指标，以判定茶多酚是否能抑制肿瘤新生血管形成。
1 材料与方法
1.1 动 物
雄性ICR小鼠，体重18g～20g，购自南京中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK（苏）2002?鄄0053。
1.2 药 物
茶多酚，购自中国农业科学院杭州茶叶研究所，纯度98%。人参皂苷Rg3为参一胶囊，每粒含人参皂苷Rg3 10mg，购自吉林亚泰制药有限公司，批号20030601。三健牌环磷酰胺（CTX）购自上海华联制药有限公司，批号020706。
1.3 试 剂
血管内皮生长因子（VEGF）Ab?鄄3(JH121)，购自美国NEOMARKERS公司，批号350P302；金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ（TIMP?鄄2）Ab?鄄5（Clone3A4），购自美国NEOMARKERS公司，批号148SP208；免疫组化超敏鼠组织试剂盒（UltrasensitiveTM S?鄄P），购自福州迈新生物技术开发有限公司。
1.4 仪 器
TSJ?鄄Q全自动脱水机，BMJ?鄄Ⅲ型包埋机，BMJ?鄄Ⅲ型病理组织包埋冷冻台，PHY?鄄Ⅲ型病理组织包埋漂烘仪，Reichert Histo STAT切片机，德国产ZEISS三目光学显微镜。
1.5 方 法
1.5.1 建立小鼠肉瘤模型
取ICR小鼠130只，体重18g～20g，雄性。以S180为瘤株进行小鼠肿瘤移植。移植方法如下：选择培养1周的S180腹水瘤小鼠，抽取乳白色腹水，血性腹水不用，加生理盐水适量稀释成1∶4的瘤细胞悬液，调细胞数至1×108左右，每只鼠种0.2ml于右前肢腋窝下，整个接种时间在1h内完成。 1.5.2 实验分组
待肿瘤生长至100mm3～300mm3时，将荷瘤小鼠随机分为茶多酚口服灌胃、局部注射、腹腔注射、人参皂苷Rg3口服灌胃、CTX腹腔注射对照、生理盐水肿瘤模型对照、正常空白对照7组。其中，茶多酚不同给药途径3组又分大、中、小3个剂量组。共计13组，每组10只。
1.5.3 给药剂量与方法
①茶多酚口服灌胃组：采用人与实验动物剂量换算法确定大剂量组为6.75mg/d、中剂量组为2.25mg/d、小剂量组为0.75mg/d 。生理盐水配制，每天灌胃0.4ml。②茶多酚腹腔注射组：按茶多酚小鼠腹腔注射LD50换算大剂量组为2.4mg/d、中剂量组为0.8mg/d、小剂量组为0.27mg/d。生理盐水配制，每天注射0.2ml。③茶多酚局部注射组：大剂量组为7.2mg/d、中剂量组为2.4mg/d、小剂量组为0.8mg/d。生理盐水配制，每天注射0.1ml。④人参皂苷Rg3对照组：0.1mg/d生理盐水配制，每天灌胃0.4ml。⑤CTX对照组：按每天50mg/kg腹腔注射给药，每天注射0.2ml。⑥生理盐水肿瘤模型对照组：以0.4 ml/d生理盐水灌胃。⑦正常空白对照组：以0.4 ml/d生理盐水灌胃。按照抗肿瘤药物药理实验方法规定，通常合成化合物、天然产物的纯品给药5次，故连续用药5d，于第6d处死小鼠，并迅速取材，制备标本。
1.5.4 检测方法转贴于 酷文网-论文下载中心 http://www.coolwen.net
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