淫羊藿总黄酮的提取方法研究

【摘要】  目的：考察选择提取淫羊藿总黄酮的最佳方法，研究超声法、超临界萃取法、半仿生提取法、索氏提取法、回流法、水煎煮法六种提取方法提取淫羊藿中总黄酮的提取效率。方法：采用754分光光度计测定样品中总黄酮的含量。结果：用索氏提取法得的总黄酮含量最高。结论：超声提取法是合适的提取方法。

【关键词】  淫羊藿 总黄酮 提取

    A study on the Extractive Technology of Total Flavone from Herba Epimedii

    【Abstract】Objective:To study four technological process,ultrasonic wave extraction,soxhlet’S extractor,circumfluence ,and water extraction,a better technological condition to extracting gogal flavone from Herba Epimedii was obtained.Methods:By using the 754 type’s UV spectrophotometer ,analyzing the content of total flavone of each sample.Results:Using soxhlet’s extractor ,the content of total flavone is the highest among four technological process.Concusion:A better technological condition to extracting total flavone from Herba Epimedii is ultrasonic wave extraction.

    【Key words】Herba Epimedii  total flavone  extract   

    淫羊藿（Epimedium brvicornum Maxim）属小檗科植物，性温，味甘辛，归肝、肾经，临床上常用于阳痿遗精，筋骨酸软，风湿痹痛，麻木拘挛及更年期高血压[1]。现代化学成分研究显示，淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿总黄酮（淫羊藿苷、淫羊藿次苷）和淫羊藿多糖，其总黄酮具有增加脑血流量和冠脉流量、抗肿瘤、抗氧化和增强机体免疫力等功能[2]。为了选择确切的方法，我们用70%乙醇进行了超声法、超临界萃取法、索氏提取法、回流法、半仿生提取法的比较研究，同时进行了水煎煮法的对比实验，从中找出准确、简便、快速的提取方法。

    1  实验材料

    1.1  仪器  754紫外光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂），TG328A（s）型分析天平（上海精科天平厂），PHS-3C型精密酸度计（上海电光器件厂），HA121-50-01超临界萃取装置（江苏南通华安超临界萃取有限公司）。

    1.2  药品  淫羊藿（购于黄河药材市场）经甘肃中医学院生药教研室鉴定为植物淫羊藿；淫羊藿苷标准品（购于中国药品生物制品检定所）。

    2  实验方法与结果

    2.1  标准曲线制备  精密称取干燥至恒重的淫羊藿苷标准品4.6mg置25ml容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度。再分别吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml置于25ml容量瓶中，分别以70%乙醇定容至刻度。以70%乙醇为空白，在270nm处测吸收度，以吸收值（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线。将所得数据进行统计处理，得回归方程：A=0.049270C＋0.039796，r=0.9991，线性范围为3.7～18.4μg/ml。

    2.2  提取方法

    2.2.1  超声提取  取淫羊藿粗粉1g加70%乙醇20ml，超声提取1h，提取液过滤，置于25ml容量瓶中，并用70%乙醇定容至25ml容量瓶中，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml至25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。

    2.2.2  索氏提取  取淫羊藿粗粉1g，置于索氏提取器中，加70%乙醇100ml，抽提6h，加收乙醇至干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后以70%乙醇定容至25ml容量瓶中，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。

    2.2.3  回流法  取淫羊藿粗粉1g，用20ml 70%乙醇回流提取2次，每次1h，合并药液，回收乙醇至干，用70%乙醇溶解，滤过后以70%乙醇定容至25ml容量瓶中，吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，从中吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。

    2.2.4  水煎煮法  取淫羊藿粗粉4g，加水80ml浸泡1.5h，煎煮2次，每次1h，滤过合并药液，水浴蒸干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后定容到100ml容量瓶中，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。  以上实验各重复3次，计算出总黄酮含量平均值。

    2.2.5  半仿生提取  取淫羊藿粗粉按L9（34）正交表，以淫羊藿苷含量为指标进行正交实验。滤过合并药液，水浴蒸干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后定容到25ml容量瓶中，再吸取5ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度摇匀，供含量测定。

    2.2.6  超临界萃取  取淫羊藿细粉过三号筛并精密称量200g，按表4做实验，萃取物水浴蒸干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后定容到100ml容量瓶中，再吸取0.5ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度摇匀，供含量测定。

    2.3各样品的含量测定

    分别取上述提取液，以70%乙醇为空白，270nm为测定波长，测定各待测液压的吸收值。将测得的吸收值A代入回归方程，计算样品液的浓度，并换算成样品百分含量见表1。表1  不同提取方法的总黄酮含量注：半仿生提取与超临界提取的平均含量均取最高值。

    2.4  半仿生提取法正交实验设计

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