流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1/Th2细胞因子表达

　　讨 论

　　流式微珠阵列法以微珠大小和荧光强度（道数）在同一反应体系中区分和定量检测10种细胞因子：细胞因子抗体包被到两种不同大小的微珠上：   5.5  μm（包被IL-2、IL-6、IL-8、IL-10 和IFN-γ单克隆抗体）和4.4 μm(包被IL-1β、IL-4、IL-5和TNF-α、TNF-β单克隆抗体)，同一微珠上的抗体结合不同强度的荧光染料并被激发得到不同的荧光道数。如图1所示，IL-2、IL-6、IFN-γ处于同一微珠不同的荧光检测道数，TNF-α则处于不同的微珠上，因此CBA方法能最大限度地消除不同反应体系所带来的各种误差和同一反应体系内各细胞因子间的交叉反应。本方法能客观动态的反映Th1/Th2细胞因子变化和平衡状态，从而利于我们探讨细胞因子间的相互影响和网络效应。因流式微珠阵列法的多种优点，美国食品和药物管理局（FDA）和人类基因组计划均要求使用该方法检测细胞因子［5］。

    本研究组以CBA法测定IFN-γ诱导Jurkat细胞表达Th1/Th2细胞因子，研究结果显示，IFN-γ处理过的Jurkat细胞IL-2、TNF-α等 Th1型细胞因子表达量呈IFN-γ浓度依赖性升高，同时，CD25（mIL-2R） 表达也明显升高，Th2型细胞因子IL-6则不表达。浓度优势的Th1型细胞因子预示着活跃的抗肿瘤免疫能力： IL-2刺激NK细胞或CTL细胞的杀瘤活性，TNF-α抑制肿瘤细胞增殖并促使其凋亡；CD25表达升高将提高肿瘤细胞对IL-2的敏感性并增强抗肿瘤效应，一般认为这代表预后良好。本研究结果证实，IFN-γ具有应用于T淋巴细胞白血病治疗的潜在价值，同时，本研究首次揭示了Jurkat细胞能被诱导表达Th1类细胞因子及其受体，后者对T淋巴细胞白血病的治疗有着重要意义，即体内T淋巴瘤细胞可能具有同样的诱导表达和形成局部优势的Th1细胞因子的能力，这一点还有待深入研究，但毫无疑问，对于准确和客观地评价体内Th1/Th2细胞因子动态变化，CBA法应当成为首选方法之一。

【参考文献】
  　　1Hodge G，Hodge S，Haslam R，et al.Rapid simultaneous measurement of multiple cytokines using 100 sample volumes-association with neonatal sepsis.Clin Exp Immunol，2004； 137:402-407

　　2Khan SS，Smith MS，Reda D，et al.Multiplex bead array assays for detection of soluble cytokines: comparisons of sensitivity and quantitative values among kits from multiple manufacturers.Cytometry B Clin Cytom，2004; 61:35-39

　　3Aoe K，Hiraki A，Murakami T，et al.Relative abundance and patterns of correlation among six cytokines in pleural fluid measured by cytometric bead array.Int J Mol Med，2003;12:193-198

　　4Morgan E，Varro R，Sepulveda H，et al.Cytometric bead array: a multiplexed assay platform with applications in various areas of biology.Clin Immunol，2004;110:252-266

　　5Tarnok A，Hambsch J，Chen R，et al.Cytometric bead array to measure six cytokines in twenty-five microliters of serum.Clin Chem，2003;49(6 pt 1):1000-1002