免疫重建荷人卵巢癌-SCID鼠模型的建立

【摘要】  　　［目的］ 探讨建立具有人免疫学特征的卵巢癌-SCID鼠模型的可行性。［方法］ 将16只雌性SCID小鼠随机分为4组。A组：磷酸盐缓冲液( PBS)0.5ml；B组为荷HO-8910组：HO-8910 细胞1×106个/ 只；C组为人免疫重建组：PBL细胞4×107个/只，进行免疫重建；D组为荷HO-8910免疫重建组：PBL细胞4×107 个/只，24h后腹腔注射HO-8910 细胞1×106个/只，观察各组小鼠的生物学及免疫学特性。［结果］免疫重建鼠的骨髓、肝脏、脾脏、胸腺、淋巴结、外周血、腹腔液中检测到人源性细胞；荷HO-8910细胞免疫重建组小鼠移植瘤体积小于荷HO-8910组小鼠；各组均无移植物抗宿主病(GVHD)发生。［结论］初步建立免疫重建荷人卵巢癌-SCID鼠模型，为卵巢癌治疗的临床前研究提供了理想动物模型。

【关键词】  卵巢肿瘤　SCID小鼠　疾病模型　动物

    Establishment of Hu-PBL-SCID Mice Model of Ovarian Carcinoma

       Abstract: ［Purpose］ To investigate the feasibility of establish a human ovarian carcinoma model in human lymphocyte-engrafted to severe combined immunodeficient (hu-PBL-SCID) mice. ［Methods］ Sixteen SCID mice were randomly divided into 4 groups: group A with intraperitoneally phosphate buffered saline(0.5ml each mouse), group B with human ovarian carcinoma cells HO-8910(1×106 each mouse), group C with human peripheral blood lymphocyte(PBL) (4×107 each mouse) for immune reconstruction, and group D with PBL(4×107 each mouse) and HO-8910 (1×106 each mouse) cells. The biological and immunological features of each groups were evaluated. ［Results］ Human immunological cells were detected in bone marrow, liver, spleen, thymus, lymphoid node, peripheral blood and peritoneal fluid of hu-PBL-SCID mice. The volume of tumor were less in the reconstruction of human immunsystem group. No graft-versus-host disease(GVHD) was found in all groups. ［Conclusion］ A human ovarian carcinoma model has been established in hu-PBL-SCID mice which is an ideal animal model for preclinical research and treatment for ovarian carcinoma.

    Key words: ovarian neoplasms; mice, SCID; disease model, animal

    卵巢恶性肿瘤发病率占妇科恶性肿瘤第3位，而其死亡率却位居首位，对卵巢癌的研究已成为妇科恶性肿瘤主要的研究方向。本研究通过建立免疫重建荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷(SCID) 鼠模型，观察其生物学、免疫学特性，为进一步研究卵巢癌的生物学行为，寻找新的、更有效的免疫治疗方法提供一种更能模拟人体免疫环境下的荷瘤动物模型。

    1 材料与方法

    1.1 材 料

    SCID鼠： 购自中山医科大学实验动物中心，雌性，4~5周龄，体重20g~25g，共16只。在本实验室屏障系统内饲养，一切进入屏障系统的人、动物、饲料、水、空气、铺垫物及各种用品均须经过严格的微生物控制。

    肿瘤细胞系： 人卵巢癌细胞系HO-8910购自中科院上海细胞所。

    人外周血淋巴细胞(PBL)：来源于健康女性志愿者的外周静脉血，由我院血库提供。

    试剂及仪器： RPMI-1640培养基购自美国GIBCO公司，淋巴细胞分离液购自上海华精生物有限公司，鼠抗人单克隆抗体CD3-CY、CD19-FITC、HLA-ABC-PE购自BD PharMingen 公司，流式细胞仪购自美国Becton Dickinson公司。

    1.2 方 法

    1.2.1 细胞培养

    HO-8910细胞培养于RPMI-1640完全培养基（10％热灭活新生牛血清），置于37℃、5％CO2孵箱中培养，根据细胞生长状态换液传代。HO-8910细胞是贴壁细胞，传代及试验前需用0.25％胰蛋白酶溶液消化。

    1.2.2 分离人外周血淋巴细胞(hu-PBL)

    用淋巴细胞分离液按常规方法分离后，PBS 液悬浮细胞并计数，调整细胞浓度为8×107/ml。

    1.2.3 动物分组、肿瘤移植及免疫重建

    A组即空白组：磷酸盐缓冲液( PBS)0.5ml；B组即荷HO-8910 组：HO-8910 细胞1×106个/只；C组即免疫重建组：PBL 细胞4×107个/只，进行免疫重建；D组即荷HO-8910细胞免疫重建组：PBL 细胞4×107 个/只，24h 后注射HO-8910 细胞1×106个/只。所有动物在移植前采用6MV X线直线加速器一次性全身照射，剂量率为150cGy/min，总剂量为300cGy。所有的细胞均悬浮在PBS0.5ml 中，HO-8910细胞皮下注射于NOD/SCID鼠左侧腋下，PBL 细胞经腹腔注射。

    1.2.4 各组荷瘤SCID鼠的生物学、免疫学特性观察

    (1)生物学特性：荷瘤鼠生长情况观察：荷瘤后观察各组鼠行为、营养状态等改变,若28d后仍生存，摘眼球取血处死。大体检查：处死SCID鼠后进行解剖，肉眼观察移植瘤生长表面形态、直径、质地、活动度情况。组织学观察：移植肿瘤及各脏器石蜡包埋、切片、HE染色，在光学显微镜下行组织学检查。

    (2)免疫学特性：小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠肝、脾、胸腺、淋巴结、外周血、腹腔液细胞悬液测定人CD3、CD19、HLA-ABC阳性细胞比例。移植物抗宿主疾病(GVHD)情况：主要脏器如肝脏、脾脏、结肠等组织HE染色，GVHD诊断标准参照文献[1]。

    2 结 果

    2.1 荷瘤SCID 鼠生物学特征转贴于 酷文网-论文下载中心 http://www.coolwen.net

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