VEGF在鼻咽癌中的表达及其与预后关系

【摘要】  　　［目的］ 研究血管内皮生长因子（VEGF）在鼻咽癌中的表达与鼻咽癌患者预后的关系。［方法］ 通过组织芯片技术与免疫组织化学方法回顾性研究1990~2002年期间200例有临床随访资料的鼻咽癌组织中VEGF蛋白的表达情况，应用卡方检验分析鼻咽癌组织VEGF蛋白表达与临床病理参数之间的关系，并通过生存分析计算鼻咽癌组织内VEGF不同表达组的总生存率。［结果］ VEGF在鼻咽癌组织中阳性表达主要位于肿瘤细胞胞浆内。VEGF在鼻咽癌组织中的表达与鼻咽癌患者的TNM分期、复发及远处转移呈正相关（P＜0.05）。VEGF表达阳性及阴性患者5年生存率分别为40.11%和67.75%，两组生存率存在显著性差异（P<0.01）。［结论］ VEGF的表达与鼻咽癌患者TNM分期、复发及远处转移呈明显正相关，其高表达提示预后不良。

【关键词】  鼻咽肿瘤　组织芯片　血管内皮生长因子　预后

　　The Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in Nasopharyngeal Carcinoma and Its Relationship with Prognosis

      Abstract: ［Purpose］ To investigate the expression of vascular endothelial growth factor（VEGF） in nasopharyngeal carcinoma (NPC) and its relationship with prognosis of NPC. ［Methods］ The expression of VEGF in 200 cases of NPC with followed-up data from 1990 to 2002 was analyzed by high-throughput tissue microarray technology and immunohistochemistry. The relationship between expression of VEGF and clinical characteristics of the patients with NPC was analyzed with chi-square test. The survival rates between different tissues VEGF expressions in NPC were compared. ［Results］ The positive expression of VEGF in NPC was observed mainly in cytoplasm of tumor cells. And the expression of VEGF in NPC tissue positively correlated with the TNM stage, recurrence and distant metastasis(P＜0.05). The 5 year overall survival rates of patients with positive and negative expression of VEGF were 40.11% and 67.75% respectively. The survival rates of different groups were significantly different by log rank test（P＜0.01）. ［Conclusion］ The expression of VEGF in NPC tissue positively correlated with the TNM stage, recurrence and distant metastasis. High expression of VEGF in patients with NPC predicts poor prognosis.

    Key words: nasopharyngeal neoplasms; tissue microarray; vascular endothelial growth factor; prognosis

    肿瘤的生长及扩散与肿瘤血管生成密切相关，肿瘤在生长过程中能分泌多种物质来促进新生毛细血管的形成。血管内皮生长因子(VEGF)是从黏液细胞或神经母细胞瘤中提取的较强的血管生成因子，能特异性地结合血管内皮细胞，促进内皮细胞生长，增强血管通透性，从而协助肿瘤细胞进入脉管系统，加速肿瘤的扩散与转移，影响患者的预后。1998年Kononen等[1]发明了组织微阵列技术，从而正式建立了现代组织芯片的概念。能将数十、百个标本承载在一个受体蜡块上，允许在一次实验中对多个病人样本的一个分子指标进行测定。本文应用此技术研究VEGF在鼻咽癌组织中的表达与预后的关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料来源

    收集中山大学附属肿瘤医院病理科1990~2002年期间200例有完整临床随访资料的鼻咽癌组织标本，因为脱片、无效组织以及部分标本癌组织过少难以判定，最后进入实验的标本总计188例。患者年龄14~86岁，中位年龄47.81岁，其中临床分期早期（TNMⅠ/Ⅱ期）42例，晚期（TNMⅢ/Ⅳ期）146例。

    1.2 组织芯片的制作

    将所收集的石蜡标本分别找出对应的HE片，显微镜下重新阅片，标出癌组织较大的区域，并在相应的石蜡块上作出标记，作为供体石蜡区域。用组织阵列仪空心针在受体石蜡上钻取直径为1mm，深度2mm~3mm的孔径，在供体石蜡所标记区域内取同样大小和深度的组织块种植到受体石蜡对应的孔径内，各阵点分别横向纵向编序，各序号与相应的蜡块及患者临床资料一一对应。并将构建好的组织微阵列模块在60℃烤箱中放置将近1h，使组织块与蜡块溶为一体。

    1.3 组织芯片的免疫组化染色

    应用免疫组化SP法，切片常规脱蜡水化，3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，组织抗原微波修复（EDTA缓冲液，pH=8.0），血清封闭非特异性抗原，滴加一抗（购自ZYMED公司，VEGF鼠抗人单克隆抗体，工作液），湿盒4℃冰箱孵育过夜，二抗SP试剂盒为北京中山生物公司产品，DAB显色。

    VEGF表达以肿瘤细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色，根据阳性细胞所占肿瘤细胞的比例来判定表达结果，随机选取4个400倍视野，癌巢区域所占比例的平均数≤10%为（－），11%~20%为（+），21%~50%为（++），＞50%为（+++）。

    1.4 统计方法

    采用SPSS12.0统计分析软件，计数资料采用卡方检验，Life table法计算生存率并绘制生存曲线，Kaplan-Meier法进行单因素生存分析，Log-Rank检验比较各组生存率。

    2 结 果

    2.1 鼻咽癌组织中VEGF蛋白表达与鼻咽癌临床病理指标的关系

    将VEGF在鼻咽癌组织中的表达分为阴性组（－）与阳性组（＋，＋＋，＋＋＋），组织芯片染色结果如图1。

    分析VEGF与临床指标之间的关系，结果显示鼻咽癌组织中VEGF蛋白的表达与鼻咽癌患者的年龄、性别、鼻咽癌患者血清中VCA-IgA 、EA-IgA抗体滴度以及DNA酶的浓度无关（P＞0.05），而与TNM分期、复发及远处转移呈正相关（P＜0.05），见表1。

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