分段扩增TβR-Ⅱ编码序列的PCR结果
PCR扩增目的基因，在902和720 bp处可见目的基因条带（图1）。
测序结果
检测TβR-Ⅱ编码序列，在所检测的6例病人中有2例病人的TβR-Ⅱ 5’ 端编码序列在相同位置有一长75 bp序列一致的插入片段，在对照组均未检测到存在同种型(图2、3）。
病人TGF-βⅡ型受体5′端编码序列结果如下（正向，反向略）（斜黑体字表示插入的序列）：
病人临床检测结果
所检测的6例病人，编号为2、4号的2例病人存在TβR-Ⅱ同种型，其初治时的白细胞数较其他病人高，缓解期短，生存期短(随访日期截止2005年4月1日)，其中1例病人入院血常规检查：WBC 350×109/L，入院后48小时死于脑出血（附表）。Table.Characteristics of 6 patients with acute leukemia（略）
讨 论
TGFβⅡ型受体是分子量为70-80 kD跨膜糖蛋白，由信号肽、胞外区、疏水跨膜区和胞内参与信号转导的具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的区域组成，其中胞外区可分为3部分：N-端（1-50位氨基酸）、富含Cys的中心区（51-152位氨基酸）和近跨膜区（153-159位氨基酸）。在TGF-β信号转导通路中，活化的TGF-β或者直接结合TβR-Ⅱ或者通过β-多聚糖间接结合TβR-Ⅱ，形成TGFβ/TβR-Ⅱ复合物，从而与TβR-Ⅰ结合并导致TβR-Ⅱ自身的磷酸化，通过这一磷酸化的过程将信号由胞外转导至胞内，从而发挥其抑制细胞增殖、诱导细胞分化或凋亡的作用［6］，由于TGF-β需与TβR-Ⅱ结合才能发挥其抑制细胞生长和促进细胞分化的功能，因此TβR-Ⅱ被视为新的抑癌基因。研究表明，在许多肿瘤中存在TβR-Ⅱ的改变，主要表现为水平下降、基因突变或功能丧失，使得肿瘤细胞失去对TGF-β的反应性，如在胰腺癌、胆管癌［7］中存在 TGFβⅡ型受体水平下调，在结肠癌［8］中TGFβⅡ型受体发生突变，导致功能失活，肿瘤细胞因此失去对TGFβ的反应性。在血液系肿瘤方面，国外有报道，在人类慢性粒细胞白血病与慢性淋巴细胞白血病中存有TβR-Ⅰ或TβR-Ⅱ的缺陷，人类表皮T细胞淋巴瘤细胞中TβR-Ⅱ处于失活状态［2，3］，而在鼠急性红白血病细胞株F5-5.fl中TβR-Ⅱ突变可能致使细胞失去对TGF-β1的反应性［9］，但有关其在人类急性白血病中是否存在异常未见报道。
本研究检测6例急性白血病病人和11例健康供髓者发现2例病人TβR-Ⅱ编码序列在相同的位置插入一个75 bp序列相同的片段，经同源性分析后发现，含有这一片段的TGF-βⅡ型受体序列被日本学者Nikawa［5］命名为TβR-Ⅱ同种型，在急性白血病的表达未见相关报道。存在TβR-Ⅱ同种型的病人，1例为52岁男性，经骨髓象、细胞免疫分型诊断为：急性B淋巴细胞白血病（L2），经2个疗程标准方案化疗获得缓解，但2个月后复发，再经2个疗程标准方案化疗获缓解，但1个月后复发，经多次化疗未获缓解死于肺部细菌、霉菌二重感染；另1例为30岁男性，经骨髓象、细胞免疫分型诊断为：急性粒细胞白血病（M1），入院时合并左颞枕叶和右顶叶出血、DIC，在入院后48小时因颅内出血死亡。在未检出变异体的4例病人中，3例经1疗程化疗即获缓解，1例经2疗程化疗获缓解，余情况详见附表。而且由附表可见，在所检测的6例病人中，含同种型的病人初治时的白细胞数也较其他病人高。本研究中所发现插入片段位于TβR-Ⅱ的N-端，这一插入不仅使得N-端多出25个氨基酸，而且将插入点氨基酸由缬氨酸变为天冬氨酸。有报道认为［10］，N-端与TGF-β的结合无关，但Pepin等［11］发现，TβR-Ⅱ的N-端抗体可以阻止TGF-β与TβR-Ⅰ的结合。因此我们推测，所插入片段不影响TGFβ/TβR-Ⅱ复合物的形成，但可能致使该复合物与TβR-Ⅰ的亲和力下降，从而导致TβR-Ⅱ磷酸化受影响，由于TβR-Ⅱ自身磷酸化是信号转导所必需的，因此其受影响就使得细胞失去TGF-β对其的负调控作用，细胞大量增殖，并促进肿瘤细胞的耐药。
【参考文献】
1Blobe GC，Schiemann WP，Lodish HF. Role of transforming growth factor beta in human disease.N Engl J Med，2000; 342:1350-1358
2Rooke HM，Vitas MR，Crosier PS，et al.The TGF-beta type Ⅱreceptor in chronic myeloid leukemia: analysis of microsatellite regions and gene expression.Leukemia，1999; 13:535-541
3Kadin ME，Cavaille-Coll MW，Gertz R，et al.Loss of receptors of for transforming growth factor beta in human T-cell malignancies.Proc Natl Acad Sci USA，1994; 91:6002-6006
4萨姆布鲁克J，弗里奇EF，曼尼阿蒂斯T.分子克隆实验指南. 第三版.北京：北京科学出版社，2002：35-38
5Nikawa J.A cDNA encoding the human transforming growth factor beta receptor suppresses the growth defect of a yeast mutant.Gene，1994;149:367-372
6Lin HY，Wang XF，Ng-Eaton E，et al.Expression cloning of TGF-beta type Ⅱ receptor，a functional transmembrane serine/threonine kinase.Cell，1992; 68:775-785
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