作者：马一婷，宋矿余，王辉
【摘要】 目的：为了解深圳地区淋球菌的营养型分布和4 种抗生素的耐药性。方法：对深圳地区113株淋球菌进行MIC测定和PPNG检测，同时对其中113株淋球菌进行营养分型检测。结果：113株淋球菌中检出PPNG菌株9株，TRNG菌株16株，青霉素耐药菌株73株(64.60%)，环丙沙星耐药菌株88株（77.88 % ），大观霉素、头孢曲松未发现耐药菌株。113株淋球菌分16种营养型，以 Pro型、Proto 型、Prolle型、Lle型、Prolle Ser型5种营养型为主，占86.73%，其余11种营养型占13.27%。青霉素和环丙沙星的耐药菌株主要分布于Pro型中，TRNG菌株主要分布于Lle型，PPNG菌株散在于各种营养型中。结论：深圳地区淋球菌的营养型和耐药性的分布状况，有助于本地区淋球菌的流行病学研究和淋病防治。
【关键词】 淋病奈瑟氏菌； 营养型； 耐药性
Research for Distribution of Auxrypes and Antibitic Resistance of Neissia Gonorrboeae in Shenzhen
Abstract: Objective To invesligale distribution of auxlypes and antibiolic resislance of Neissia gonorrboeae in shenzhen. Methods One hundred and thirteen isolales of N.gonorrhoeae were delermined for MICs and PPNG, among which 113 were auxolyped. Results It was showed that 9 strains from 113 strains were PPNG, 16 TRNG, 73 penicillinresistant strains(64.60%), 131 ciprofloxacinresistant strains.No strains were found to be spectinomycin or cefotriaxon resistang, One hundred and thirteen strains were classified into 16 auxotypes,most of which pertained to such five auxotypes as pro,proto,prolle,lle,prolleser, accounting for 86.73% and the other 11 auxolypes contributed the rest of 13.27% .The most of penicillin and ciprofloxacin resistant stains belonged to Pro,and TRNG strains to Lle,and PPNG strains showed various auxotypes. Conclusion The study represented the distribution of auxotypes of N.gonorrhoeae and its susceptibility.It is helpful for the study of emidemiological research and control of gonorrhea in Shenzhen.
Key words: Neisseria gonorrhoeae;Auxotype;Susceptibility
淋病是我国性传播疾病的主要病种,越来越引起人们的广泛关注,淋球菌是淋病的病原菌。淋病治疗过程中抗生素的滥用以及用药的不规范，产生了新耐药菌株和新的耐药谱，给临床治疗带来了困难。本文对2005年4月至2006年4月深圳地区的淋球菌营养型和耐药性进行研究，现将研究结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株来源
实验菌株均从我区门诊患者的泌尿生殖道分泌物中分离，所有菌株经革兰染色、氧化酶试验和糖发酵试验证实为淋球菌后传代一次，洗于脱脂牛奶中，于-78℃低温冰箱冻存备用。
1.1.2 抗生素
大观霉素由美国UpJohn公司生产，头孢曲松为瑞士Roche公司生产，四环素、青霉素、环丙沙星由澳大利亚威尔士亲王医院 Tapsall博士提供。
1.1.3 培养基
@A基础培养基(OXOID)公司生产加入脱纤维新鲜羊血。
1.1.4 标准菌株
WHO A、B、C、D、E标准淋球菌菌株及营养型的CDC标准菌株由中国医学科学院皮肤病研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 最低抑菌浓度（MIC）测定
采用WHO西太区淋球菌耐药监测规划推荐的琼脂稀释法。即先将4种抗生素按要求配成原液，再倍比稀释成不同的浓度。将3.7%GC基础琼脂高压灭菌，水浴冷却至50℃，加入脱纤维新鲜羊血 (终浓度10%)。取0.1 ml倍比稀释好的4种抗生素工作液，加入10 ml血液基础培养基，混匀后倾倒平板，从低浓度至高浓度配制各种浓度的平板，实验菌株和标准菌株用18 h~24 h的淋球菌菌苔，制成10 cfu/ml的菌悬液，用多头接种器将菌悬液接种于各种浓度的平板，置36℃、5%CO2环境下培养，36 h后观察结果，记录无菌落生长的最低抑菌浓度。以WHO A、B、C、D、E标准菌株作质控。
1.2.2 β内酰胺酶测定
采用纸片碘量法测定菌株的β内酰胺酶，即取一试管，加入2滴100 000 U/ml的青霉素溶液，2滴1%淀粉溶液，1滴碘试剂，呈蓝色混合物，在一滤纸条上滴一滴试剂，将一接种环培养物涂在蓝点上，放置1 min~2 min，如蓝色变成无色即为β内酰胺酶阳性菌株，颜色无变化则为阴性。每次试验以WHO E株作阳性对照，A株作阴性对照。
1.2.3 营养分型
分型培养基：按文献［1］介绍的方法制备。完整 GGM（gonococcal genetic medium）含有谷氨酸、精氨酸（Arg）、 蛋氨酸（Met）、脯氨酸（Pro）、天冬氨酸、丝氨酸 （Ser）、异亮氨酸 （Lle）、胱氨酸和半胱氨酸8种氨基酸，次黄嘌呤（Hyx）和尿嘧啶（Ura）2 种碱基，以及琼脂、可溶性淀粉、维生素和辅酶等。非完 整GGM培养基（营养分型培养基）；完整GGM培养基缺少上述某一氨基酸或碱基。分型方法：复活冻存菌株，于GC培养基传代后，取18 h~24 h培养物制备成菌悬液，分别接种于完整GGM平板和各分型平板，CO2环境下36℃培养24 h后观察结果。根据菌株在不同培养基上的生长情况判读其营养型，在所有营养分型培养基上均生长者为Proto（原型），在某一分型培养基上不生长者记为如Ura（尿嘧啶）、Pro（脯氨酸）、AHU（精氨酸、次黄嘌呤和尿嘧啶）。每批试验均以CDC 标准营养分型菌株进行质量控制。
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