HLA-DRB 1 基因对小儿急性肾小球肾炎的影响

【关键词】  急性肾小球肾炎,HLA-DRB,1,基因,ssp/PCR

　　【摘要】 目的 探讨急性肾小球肾炎发生及发展与HLA-DRB 1 等位基因的关系，寻找该病的HLA-DRB 1 易感基因。方法 采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法对急性肾小球肾炎患儿和正常儿童的HLA-DRB 1 等位基因进行分析，并分析了HLA-DRB 1ˇ 15基因型在急性肾小球肾炎中所起的作用。结果 急性肾小球肾炎患儿HLA-DRB 1ˇ 15基因频率为（16.25%），与正常对照组比较差异有非常显著性（P<0.01）;HLA-DRB 1ˇ 15型急性肾小球肾炎患儿临床症状表现重。结论 HLA-DRB 1 基因型对急性肾小球肾炎的发生、发展有一定的影响;探讨急性肾小球肾炎的HLA-DRB 1 基因型对于病情预测有重要意义。

　　关键词 急性肾小球肾炎 HLA-DRB 1 基因 ssp/PCR

    The influence of HLA gene on acute glomerulonephritis    
　　【Abstract】 Objective To study the relation between acute glomerulonephritis occurence and development and HLA gene，then to find HLA predisposing gene of this disease.Methods Using ssp-PCR method to study acute glomerulonephritis patient’s HLA gene and assay different clinical situations of different HLA gene types.Results The gene frequency of acute glomerulonephritis patients is16.25%.It is significantly higher than normal control group（P<0.01）;Acute glomerulonephritis patients who was HLA-DRB 1ˇ 15were more severe.Conclusion The occurˉrenc
e and the development of children acute glomerulonephritis have some relations with HLA-DRB 1ˇ 15.It is imporˉtant to study HLA gene of children acute glomerulonephritis for judging prognosis. 

　　Key words acute glomerulonephritis HLA gene ssp/PCR  

　　目前公认免疫机制是大多数肾小球疾病发病机制的主要环节。其直接证据如:病变肾脏沉着有免疫球蛋白和补体成分，同时肾小球疾病病程中血清有免疫成分的异常。肾小球疾病的免疫发病机制十分复杂，有多种因素参与。对于免疫发病机制的研究不仅有其理论意义，还可以指导疾病的防治，具有重要的临床意义。HLA即人类白细胞抗原也称人组织相容性抗原系统，是参与机体特异性免疫识别和免疫应答的主要成分 ［1］  。我们对86例急性肾小球肾炎患者和82例健康儿童的HLA-DRB 1 基因进行了分型研究，以期发现免疫机制在急性肾小球肾炎的发病机制中所起的作用，现报告如下。

　　1 对象与方法

    1.1 对象 观察组为86例急性肾小球肾炎患儿，男42例，女44例，年龄3～16岁，诊断标准参照诸福棠第七版《实用儿科学》有关章节。对照组82例，男43例，女39例，年龄4～16岁，排除肾脏疾病，体格检查及化验均未见异常。观察组与对照组均为无血缘关系的汉族儿童。

　　1.2 方法

    1.2.1 主要试剂 Taq DNA聚合酶、dNTPs均为上海复生生物工程公司产品，琼脂糖为上海东海制药厂产品。DNA片段长度标准×174/HacⅢMarkers为北京鼎国生物工程公司产品。

    1.2.2 扩增引物设计与合成 引物按参考文献 ［2］  所示，见表1，由北京赛百盛生物工程公司合成。

　　1.2.3 内对照引物 参照参考文献 ［2］  在DRB1第3内含子内设计，由赛百盛生物工程公司合成，这个引物无位点序列特异性，可以作为内对照，序列如下:5′-TGC CAA GTG GAG CAC CCA AA，3′-GCA TCT TGC TCT GTG CAG AT;产生796bp的产物。

    1.2.4 阳性细胞DNA 由北京医科大学人民医院基因配型室馈赠。

    1.2.5 人基因组DNA提取 抽取静脉血1.0ml，2%EDTA抗凝。分离白细胞采用常规酚-氯仿方法提取DNA，然后用紫外分光光度计测其浓度。

    1.2.6 DRB 1  位点的特异性PCR抗增 通过SSP/PCR进行，一个标本需完成19个PCR反应，方能完成DRB 1 位点的分型。反应混合物包括2～4个位点或组特异PCR引物，内对照引物浓度很低，约为特异引物浓度的1/3，MgCl 2 10mm Trist-Cl、pH8.3，0.001%明胶，200mm dNTPs，1μm位点组特异引物，0.3μm内对照引物，2UTaq酶。PCR扩增在TC-1（美国PE公司）扩增仪上完成，循环条件:先94℃预变性5min，然后每个循环包括94℃1min，57℃1min，72℃1min，共35个循环，然后72℃保温5min。

    1.2.7 通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析 PCR产物的存在及缺失通过2%琼脂糖凝胶电泳进行，加2μl的6x上样缓冲液，10μl PCR产物，电压40V，电泳40min，溴化乙啶（0.5μg/ml）染色。在紫外分光光度计下观察结果，拍照。1.2.8 统计学方法 用SAS软件包进行处理。

　　表1 引物序列、长度及区分位点略　2 结果

    2.1 分型结果 DR位点基因共分19个型，其中3与17、18，18与14′有交叉，52、53可作为阳性对照，因52可与11、12、13、13′、14、14′、17、18同时出现阳性带，53可与4、7、9同时出现阳性带，分型结果见图1、2。

    图1 略

　　图2 略

    2.2 肾小球疾病患儿DRB 1 基因型及基因频率 86例肾小球疾病患者与82例正常人HLA-DRB 1 19个位点基因型及基因频率见表2，肾小球疾病组HLA-DRB 1ˇ 15基因频率为16.25，与正常对照组（基因频率4.7）比较χ 2 =7.028，P<0.01，HLA-DRB 1ˇ 15基因阳性发生急性肾小球肾炎的相对危险性OR为3.494，其他位点两组间差异无显著性，见表2。转贴于 酷文网-论文下载中心 http://www.coolwen.net